Công Ty TNHH Xuất Nhâp Khẩu Vật Tư Khoa Học Quốc Tế (STECH) - MST : 0107469877

Cách Thức Thu Plasmid Siêu Soắn

6 Mẹo Thu Plasmid Siêu Soắn Hiệu Quả Cao

Plasmid siêu xoắn là dạng được mong đợi nhất khi tách plasmid vì nó phù hợp để sử dụng trong các phân tích sau đó như giải trình tự hoặc biến nạp. Trong thương mại, plasmid dạng nick và dạng thẳng được coi là thành phần không tinh khiết trong quá trình sản xuất vaccine DNA hoặc trong các liệu pháp sử dụng plasmid DNA.

Mặc dù, dạng siêu xoắn là dạng tồn tại chủ yếu trong vi khuẩn, tuy nhiên plasmid dạng nick và dạng thẳng cũng thường bị lẫn vào với số lượng nhỏ trong hầu hết các quy trình tách plasmid. Tuy nhiên nếu như bạn không làm theo đúng một số hướng dẫn dưới đây thì bạn có thể bị lẫn nhiều các dạng plasmid này hơn. Và điều này thực sự không hề tốt một chút nào. Còn nếu như quy trình tách plasmid của bạn hoàn toàn sai thì bạn sẽ chỉ thu được toàn dạng sợi đơn và chắc hẳn không ai trong chúng ta muốn thấy điều này.

Do đó, bài viết này sẽ đưa ra cho các bạn một vài “mách nhỏ” cho quá trình tách plasmid để có thể làm giảm tối thiểu các dạng plasmid không mong muốn và thu được tối đa dạng siêu xoắn.

thu plasmid siêu soắn hiệu quả

1. Thu vi khuẩn khi đang ở pha cân bằng

- Plasmid dạng nick thường xuất hiện khi vi khuẩn được thu quá sớm trong giai đoạn sinh trưởng lũy thừa. Để tránh việc tách phải một lượng lớn DNA dạng nick, cần thu vi khuẩn khi đã ở giai đoạn bão hòa và ở trong pha cân bằng (thường là sau 12-16 giờ nuôi cấy).

2. Cần nhẹ nhàng khi vortex và pipeting plasmid

- Plasmid dạng nick hoặc dạng thẳng thường xảy ra do sự xé DNA do việc vortex hoặc lắc quá mạnh trong quá trình tách plasmid. Nên hãy thật bình tĩnh; mix thật nhẹ nhàng, nhưng cũng tránh vortex hoặc pipetting quá yếu hoặc nhẹ.

3. Không được để bước ly giải kiềm quá lâu

- Như các bạn đã biết, ly giải kiềm là bước không thể thiếu của quá trình tách plasmid khỏi DNA genome nhưng nếu như bạn thực hiện bước này quá lâu, nó có thể phá hủy hoàn toàn plasmid của bạn bằng việc biến tính plasmid thành dạng vòng sợi đơn. Nhưng đừng quá lo lắng, bạn chỉ cần giữ thời gian ủ của bước lysis theo như khuyến cáo và mix thật nhẹ nhàng ở bước này thì mọi thứ sẽ ổn thôi!

4. Cần hòa tủa cẩn thận

- Sự xé hay làm đứt gãy plasmid đôi khi xảy ra khi bạn hòa tủa plasmid sau khi để khô. Lượng plasmid càng lớn, thì sự xé càng dễ xảy ra. Hãy nhẹ nhàng sau khi tủa và để DNA hòa tan từ từ vào nước hơn là pipeting.

5. Tránh endonuclease

- Ở một vài chủng vi khuẩn nhất định thường chứa endonuclease A, một enzyme có thể khiến plasmid chuyển thành dạng nick hay dạng thẳng. Nếu như plasmid của bạn buộc phải biến nạp vào chủng vi khuẩn này, thì hãy nhanh chóng tách plasmid xa khỏi enzyme này hiệu quả nhất có thể.

6. Hãy thật bình tĩnh và thu được nhiều plasmid siêu xoắn nhất có thể

- Cuối cùng, có bài báo đã chỉ ra rằng việc thực hiện tất cả các bước ở nhiệt độ thấp (4-12°C) giúp tăng lượng plasmid siêu xoắn (theo Carbone, et. al., 2012. Biochimica Polonica. 59: 275-8.)

- Cải thiện kỹ thuật cũng như chú ý vào từng bước nhỏ trong khi làm sẽ giúp bạn tăng khả năng thu hồi plasmid siêu xoắn và cho bạn kết quả tốt nhất. Chúc các bạn may mắn! :)